妇产科临床上常需测定的激素包括雌激素、孕激素、雄激素、促性腺激素、皮质类固醇激素等等。不同时间、不同条件下测定体内激素水平对临床诊断与治疗常常具有重要的参考意义和指导价值。
常用激素测定方法主要包括生物学方法、化学方法及免疫测定方法。
一、生物学方法
生物学方法是将含有激素的体液或提取物注射到动物体内，根据动物某个器官对刺激所产生的变化如形态、重量、产生的物质等来判断激素的含量。由于方法复杂，检验结果受许多因素影响，故目前应用较少。
二、化学测定法
化学测定法是利用激素化学结构上的特点，使其与特异试剂反应，生成有颜色的物质，在分光光度计一定波长的光源下比色，根据吸光度与已知浓度的标准品比较可知激素的含量。目前仍应用于临床。
三、免疫测定法
免疫测定法具有高度的特异性和敏感性，近年来发展迅速，应用广泛。常用的方法有两种：凝集免疫法和标记免疫法。凝集试验方法为最早应用的免疫学方法，快速、准确，应用至今，但只能定性。标记免疫法常用的有：放射免疫分析法、免疫放射分析法、酶免疫分析法、荧光免疫分析法、化学发光免疫分析法、时间分辨荧光免疫分析法等。
1．放射免疫分析法(RIA) 放射免疫分析的原理是在一溶液系统中有三种成分即抗原(Ag)、放射性同位素标记抗原(Ag*)与限量的抗体(Ab)相结合，其反映方程式为Ag+Ag*+Ab—>Ag-Ab+Ag*—Ab，当加Ag*为一定量而Ab为有限量时，加入的Ag*与Ag-Ab之间形成一种函数关系。应用数学作图方法，绘制一条函数曲线，即标准曲线，可得出未知的标本值。
2．免疫放射分析法(IRMA) IRMA有三方面不同于RIA：①原理为非竞争性；②放射性核素不是标记在抗原上，而是标记在抗体上；③要求有两种抗体，一种为固相抗体，一种为标记抗体。建立IRMA时首先要选择一对能与被测激素分子上不同位点结合，彼此又互不干扰的抗体(其一必须与被测激素为特异结合)。一种作固相抗体，另一种抗体用放射性核素标记为标记抗体。固相抗体和标记抗体对被测激素来说都是过量的，固相抗体以最大程度结合被检测的激素，标记抗体又可与上述已结合的激素相结合，形成固相抗体•被测定激素•标记抗体双位点夹心复合物。洗去未被结合的标记抗体，通过检测标记抗体的放射性来检测激素的含量。IRMA是非竞争性分析法，具有快速、准确、灵敏度高、测量范围大等优点。采用已知结合位点的单克隆抗体(McAb)，通过不同配对，可以特异检测体液中不均一激素的含量。IRMA法也有其缺点，由于大分子才能制备抗体，对于小分子激素测定不适用，另外也污染环境。
3．酶免疫分析法(ELISA) ELISA是以测定酶活性来确定被测物质含量的一种方法。可分为异相和均相分析两种方法。异相分析又包括竞争性和非竞争性酶免疫分析，竞争性酶免疫分析又包括酶标记抗原和酶标记抗体两种。ELISA是在分析中以酶代替放射性核素做标记物，主要优点是酶标记的结合物很稳定，在4℃或冷冻干燥后，保存期可达一年以上。采用McAb和双位点夹心可具有更高的特异性。ELISA引入放大系统，灵敏度更高。该法避免了使用放射性核素的缺点，所以近年来发展很快。在临床内分泌中已得到广泛应用。ELISA的原理是在免疫反应达到终点时，利用酶的催化作用，使相应的底物水解，出现呈色反应，通过光度分析法进行定量。
4．荧光免疫分析法(FIA) FIA是将荧光素标记抗原或抗体作为示踪剂的一种新的免疫分析技术，其原理与ELISA相似。该法既可对液体中的抗原和抗体定量，也可对组织切片中的抗原、抗体进行定性和定量。一般由于样品、试剂的自身荧光和激发光的散射，本底荧光高，影响了测定的灵敏度。以镧系元素作为荧光标记的新型FIA，低本底、高效率，一个样品测定只需一秒钟，而且灵敏度也高于RIA，具有比RIA更多的优点，是80年代免疫分析的一个重大突破。
5．化学发光免疫分析法(CLIA) 化学发光是物质在氧化还原过程中发光的现象，能产生化学发光的物质称为化学发光剂。CLIA是把化学发光现象与免疫反应结合起来的微量免疫分析技术。免疫反映系统原理和反应形式与RIA和ELISA基本相同，只是标记物不同。用化学发光标记物代替核素标记或酶标记，当化学发光分子被氧化时，释放大量光子，而可以被检测。CLIA具有灵敏度高，特异性强，检测速度快等优点，是一类很有发展前途的微量分析技术。
6．时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA) 又称解离•增强•镧系荧光免疫分析法(DELFIA)。它是80年代初问世的另一种完全新型的非放射性免疫分析技术。其主要特点是以稀土元素铕(Eu3+)标记抗体或抗原为示踪剂，利用增强液的荧光放射作用和时间分辨荧光测量法排除样品和试剂中非特异性荧光物质的干扰，最大限度地提高了荧光信号测量的特异性和检测方法的灵敏度。最小检测限可达10+，mol／L。又加之标准曲线量程高于RIA，方法简便，标记物制备容易，稳定性好，可长期保存，无污染环境等多种优点，目前用放射免疫和酶免疫测定的物质均可用TR-FIA法测定。
7．金标法 是用紫红色的胶体金来标记单克隆抗体，做某些激素如8•hCG、LH的定性或半定量测定。
(1)层析法：将金标的一株单抗吸附于下端的玻璃纤维纸上，浸入尿液，此金标单抗即被溶解，并随尿液上行，若尿中有相应抗原，既形成Ag-Ab-金复合物，当上行至中段醋酸纤维薄膜，即与下端的另一株单抗结合并被固定下来，显示阳性结果。其上方还有一条抗鼠二抗，待有利的红色金标单抗上行此处即被固定下来，作为金标单抗质控的提示。此种方法称金标一步法。
(2)斑点渗漏法：其原理与层析法相类同，中心圆点为一株单抗，边上小点为抗鼠二抗。先将待测样品滴在其中，若有抗原即被结合在中心圆点，洗去未结合抗原，再滴加金标另一株单抗，若有抗原则形成金-Ab-Aba•薄膜的红色斑点，而边上是金-Ab-Ab2•薄膜的质控点，是为金标二步法。
金标技术是一项操作简便、快速的定性或半定量方法，且显色长期不变，便于保存。
